2016-2023
#bactéries #respiratoire
Projet Gourme EpiDiaC
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Coordination scientifique :
Dr. Albertine LEON-SECK (PhD, HDR)
Équipe projet au sein de LABÉO :
Sophie CASTAGNET (Ass. Rech. & Dév.)
Unité de recherche d’appartenance (UNICAEN) : DYNAMICURE (UMR 1311 INSERM)
Partenaires :
Dr. Pradier, Dr. Corbière (UMR INRA/ENVT 1225 IHAP), Dr. A. Waller (expert mondial, Intervac), Dr. H. Wilson (Université de Cambridge), RESPE, VS
Financeurs :
La densification du nombre de chevaux et l’internationalisation des compétitions et du commerce ont contribué au brassage d’agents pathogènes, tels que Streptococcus equi subsp equi (S. equi), bactérie responsable de la gourme. Cette maladie, hautement contagieuse, à grande morbidité et faible mortalité, entraîne des pertes économiques non négligeables. La gourme se caractérise par plusieurs signes cliniques : de l’abattement, une hyperthermie, un jetage nasal purulent, suivi d’une hypertrophie des nœuds lymphatiques. Même si la majorité des chevaux guérit spontanément en 2 à 4 semaines, certains évoluent vers des formes plus graves. Le projet GOURME EpiDiaC a été initié face à l’absence d’information sur les souches de S. equi circulant en France et à l’absence de consensus sur les outils de détection.
- Déterminer la meilleure combinaison entre les tests diagnostiques (ELISA, PCR, culture) et le type de prélèvement (écouvillon naso-pharyngé [ENP], lavage de poches gutturales [LPG], sang) afin de confirmer le statut (malade [M], sain [S], porteur asymptomatique [PAs]) d’un cheval à travers via une étude terrain.
- Caractériser et comparer les souches isolées afin de comprendre leurs particularités par rapport aux populations retrouvées à l’échelle internationale.
- Formaliser un protocole de prévention et de gestion sanitaire et le tester au sein de structures volontaires.
L’action 1) a permis d’inclure 203 chevaux répartis en trois groupes : M (n=38), S (n=83) et PAs (n=82). Un article à comité de lecture international a été soumis. Il présentait les résultats comparatifs d’ELISA, PCR, de culture sur ENP vs LPG sur les chevaux du groupe malade. Les reviewers ont demandé d’inclure tous les chevaux de l’étude dans cette analyse. Une nouvelle analyse des données a été réalisée et l’article est en cours de mise à jour. Au total, 55 souches ont été isolées. Leur caractérisation phénotypique n’a pas montré de résistance aux antibiotiques. La caractérisation moléculaire par NGS a été réalisée sur 18 souches. Elles ont été caractérisées comme appartenant à la séquence type (ST 79) par MLST, considérée comme une souche fréquemment retrouvée en Europe. Des analyses plus approfondies sur les gènes de virulence, résistance, persistance ou d’échappement du système immunitaire sont en cours, en collaboration avec les Drs Wilson et Waller. Le séquençage complet des autres souches sera réalisé à LABÉO en 2023.
Les biofilms de neuf souches isolées au cours de cette étude [trois S. equi isolées de chevaux M, trois de chevaux PAs et trois S. equi subsp zooepidemicus (S. zoo), bactéries connues pour former du biofilm] ont été caractérisés et comparés. Quatre technologies ont été utilisées : trois en statique (la coloration au cristal violet, l’impédancemétrie et la microscopie 3D à fluorescence) et une en dynamique (la microfluidique). Après une phase d’optimisation, chaque technologie a été effectuée en triplicat. Les résultats obtenus ne montrent pas de variation de la production de biofilm selon le type de portage des chevaux (M versus PAs), mais plutôt en fonction de la morphologie de la colonie des souches. En effet, les trois souches de S. equi formant du biofilm présentent de petites colonies en milieu gélosé et sédimentent en milieu de culture liquide. Le même phénotype est observé pour les trois souches de S. zoo. Les trois souches de S. equi peu ou non-productrices de biofilm, présentent quant à elles de grosses colonies sur milieu gélosé et poussent de manière homogène en milieu liquide. Ces résultats sont en cours de valorisation par un second article. Sans candidat, l’action 3 n’a pas pu être réalisée.
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EXEMPLE de mise en page possible
Étude de la production de biofilm, de la résistance aux antibiotiques et aux biocides chez des souches de Pseudomonas aeruginosa isolées chez l’Homme et l’animal
MICROBES – 15ème congrès national de la Société Française de Microbiologie, Sep 2019, Paris, France
Decreased susceptibility to didecyldimethylammonium chloride among clinical strains of Pseudomonas aeruginosa, a ten years retrospective study, at the University Hospital of Caen, France
The 31st European Congress of Clinical Microbiology & Infectious Diseases (ECCMID), Jul 2021, online, Austria.
Cette première étude sur la gourme en France a contribué au changement d’attitude des professionnels vis-à-vis de cette maladie souvent négligée. Elle a aussi permis de mettre en valeur l’expertise de LABÉO vis-à-vis des industriels (ID, BioMerieux etc.)